Sadržaj
HPLC nudi brzu, automatiziranu i vrlo preciznu metodu za prepoznavanje određenih kemijskih sastojaka u uzorku, ali to može biti skupo, složeno i ne radi za sve uzorke. Medicinski, forenzički, okolišni i proizvodni laboratoriji koriste tehniku kvantificiranja i odvajanja kemikalija u uzorku. HPLC ima i prednosti i nedostatke u usporedbi s drugim tehnikama.
HPLC i slične tehnike
Kao i drugi oblici kromatografije, HPLC omogućava razdvajanje kemijskih sastojaka upotrebom pokretne i stacionarne faze. Pokretna faza je tekuća, a stacionarna faza kruta. Budući da se različite komponente kreću različitim brzinama, odvajaju se jedna od druge. Alternativne tehnike uključuju kapilarnu elektroforezu, gdje tvari migriraju kroz otopine u električnom polju i druge kromatografske metode poput ekstrakcije krute faze, plinske kromatografije i tankoslojne kromatografije.
Brzina, efikasnost i preciznost
U usporedbi s drugim kromatografskim tehnikama, kao što je TLC, HPLC je izuzetno brz i učinkovit. Koristi se pumpa, a ne gravitacija, da bi se tekuće otapalo proguralo kroz čvrsti adsorpcijski materijal, pri čemu se različite kemijske komponente odvajaju kako se kreću različitim brzinama. Postupak se može okončati za otprilike 10 do 30 minuta, a postiže visoku razlučivost. Točan je i vrlo ponovljiv. Budući da je to uglavnom automatizirano, osnovni HPLC trčanja mogu se izvoditi uz minimalni trening.
Trošak i složenost
Unatoč svojim prednostima, HPLC može biti skup, što zahtijeva velike količine skupih organskih materijala. Tehnike poput ekstrakcije krute faze i kapilarne elektroforeze mogu biti jeftinije i brže, posebno za analizu u skladu s dobrom proizvodnom praksom. Iako je relativno lako koristiti postojeće HPLC metode, može biti složeno riješiti probleme ili razviti nove metode. To je uglavnom zbog niza različitih modula, stupaca i pokretnih faza.
Osjetljivost i razlučivost
Općenito, HPLC je svestran i izuzetno precizan kada je u pitanju prepoznavanje i kvantificiranje kemijskih komponenata. Uz puno koraka, preciznost HPLC-a uvelike se svodi na proces automatiziran i stoga vrlo ponovljiv. HPLC ima malu osjetljivost za određene spojeve, a neke nije moguće otkriti jer su nepovratno adsorbirani. Hlapive tvari bolje se odvajaju plinskom kromatografijom.