Sadržaj
Većina poslova koji se obavljaju u živoj stanici obavljaju njeni proteini. Jedno što stanica mora učiniti jest umnožavati svoj DNK.
Na primjer, u vašem je tijelu DNA duplicirana tri puta. Proteini rade taj posao, a jedan od tih proteina je enzim zvan DNK ligaza, Znanstvenici su prepoznali da ligaza može biti korisna u izgradnji rekombinantne DNA u laboratoriju, pa su ugradili korak ligacije u proces stvaranja rekombinantne DNA.
Struktura DNK
Jedan lanac DNA sastoji se od niza dušičnih baza koje idu kraticama A, T, G i C. Obično se DNK nalazi u dvostrukom lancu, gdje se jedan dugi niz baza podudara s drugim jednako dugim nizom od baze.
Dva lanca su komplementarna, jer tamo gdje jedan lanac ima A, drugi ima T, a jedan ima G, drugi ima C. A i T se međusobno podudaraju slabom kemijskom vezom koja se naziva vodikova veza, i G i C čine isto.
Dvije komplementarne niti u cijelosti su povezane mnogim vodikovim vezama. Svaka od dvije pojedinačne žice drži svoje nuklearne baze zajedno s jačom vezom u obliku dugog lanca skupina šećera i fosfata koji su kovalentno povezani.
Funkcija ligaze
O pramenu DNA možete razmišljati kao o jednoj dugoj šarm narukvici s četiri različite vrste draži. Čari se jednostavno odvajaju od snažnog lanca koji ih povezuje.
Umnožavanje DNK stvara još jednu šarmu narukvicu koja se podudara s prvom. Gdje god je A šarm na prvoj narukvici, na drugoj će narukvica stati T šarm, a isti će biti i za C i G.
Čari na drugoj narukvici mogu se podudarati s prvom narukvicom bez da su sami na narukvici. Odnosno, oni se mogu povezati do suprotnog lanca putem slabe veze bez jakog lanca koji bi ih povezao sa svojim susjedima.
Enzim DN ligaze detektira mjesta na kojima je razbijen lanac šećera i fosfata i obnavlja vezu, povezujući skupine šećera i fosfata u snažnoj vezi.
Rekombinantna DNA
Rekombinantna DNA rezultat je sjecanja dvostrukog lanca DNK i povezivanja s drugim dvostrukim lancem. Svaka dvostruka struna često se reže neravnomjerno, s time što je jedan pramen završen nekoliko osnova manje od drugog.
Postoje dodatne baze na jednom kraju, kao na primjer TTAA. Drugi dvostruki niz ima dodatne baze u nizu poput AATT. Dvije skupine dodatnih baza - nazvane "ljepljivi krajevi" - grane jedna na drugu putem slabih vodikovih veza.
Kad ponovno razmislite o narukvicama s šarmom, zamislite da imate jednu dvostruku šarm narukvicu s dva lanca povezana samo svojim šarmom. Isječete kraj, ali jedan kraj šarmirate jedan od drugog, pa malo visi o rep.
Istu stvar napravite s drugom narukvicom s dvostrukim šarmom. Ako se četiri čari međusobno nadopunjuju, dva će se šarma spojiti, ali samo kroz njihove čari.
Enzim ligaze koji se koristi u rekombinaciji
U prethodnom koraku rekombinacije DNA spojili su se ljepljivi krajevi dviju različitih dvolančanih molekula DNA. Međutim, jedina veza između dva dijela je preko slabih veza. Poput narukvice s šarmom koja je povezana samo pomoću odgovarajućih čari, bilo bi ih lako rastaviti.
Enzim DNA ligaza pronalazi mjesta na kojima skupine šećera i fosfata nisu povezane i povezuje ih. Ponovo, poput narukvice s šarmom, nakon što DN ligaza prođe kroz baze i poveže baze, nova, duža, dvolančana molekula DNK snažno je povezana.