Sadržaj
Spektrofotometar se koristi za određivanje koncentracije određenih spojeva, poput proteina, u otopini. Kroz kivetu ispunjenu uzorkom općenito svijetli svjetlost. Mjeri se količina svjetlosti koja apsorbira uzorak. Budući da spojevi apsorbiraju svjetlost u različitim spektralnim rasponima, za analizu se mora postaviti prava valna duljina. Postoje brojni načini za izračunavanje koncentracije nepoznatih uzoraka pomoću spektrofotometrije, međutim upotreba referentnih standarda daje najbolju točnost. Nadalje, standardi također pokazuju jesu li spektrofotometar neispravni ili postoje drugi problemi s analizom.
Računanje pomoću jednadžbi pravih linija
Analizirajte referentne standarde na početku analize. Standardi su poznate koncentracije i koriste se za kalibraciju opreme i provjeru točnosti. Svi uzorci trebaju biti unutar radnog raspona normi. Ako ne, uzorke je potrebno razrijediti ili povećati koncentraciju standarda.
Napravite shemu rasipanja ili linijski graf sa standardnim očitanjem koncentracije i apsorpcije. Koncentracija će biti na osi y, a apsorpcija na x-osi. Na primjer, standardi su 1 ppm, 2,5 ppm i 5 ppm. Date apsorpcijske vrijednosti su bile 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5, i 5 ppm = .75.
Formatirajte liniju trenda da biste na grafikonu prikazali jednadžbu. Jednadžba će pokazati formulu y = mx + b. Na primjer, koristeći standarde u koraku 2, jednadžba je y = .1224x + 0,1531. Većina linija trenda presijecana je na nuli, ali to ovisi o analitičkoj metodi i vrijednosti R-kvadrata.
Analizirajte nepoznate uzorke i zabilježite očitanja.
Pomoću jednadžbe (y = mx + b) odredite koncentraciju uzoraka.
Razumijevanje jednadžbe pravih linija
Neka je "Y" jednaka koncentraciji. To će se riješiti.
Neka je "X" jednaka apsorpciji uzorka. To je apsorpcija izmjerena spektrofotometrom.
Dopustite da "" izjednači nagib i "b" jednak y-presretanju. Oba su prikazana, međutim, ako je linija trenda forsirana kroz 0, tada će "b" biti 0.
Riješite za koncentraciju. Koristeći primjer iz koraka 3, zamijenite "x" kao zadanu apsorpciju od .563. Stoga:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (koncentracija) = .222011