Kao što je slučaj pri korištenju bilo kojeg znanstvenog instrumenta, prije njegove upotrebe za analizu uzorka morate biti sigurni da je instrument u ispravnom stanju. Provjeravanjem reakcije instrumenta za poznati uzorak potvrđuje se da je instrument pravilno kalibriran. Spektrofotometri zahtijevaju periodično umjeravanje kako bi se osigurala ispravna reakcija instrumenta. Infracrveni (IR) spektrofotometri koriste polistiren kao standard za kalibraciju. Pregled instrumenta s komadom polistirena u držaču za uzorak provjerit će prisutnost vrhova vidljivih na IR spektrima i relativni intenzitet vrhova.
Uključite spektrofotometar i ostavite ga da se ugrije najmanje 10 minuta. Vrijeme zagrijavanja potrebno je da se izvor stabilizira. Bez stabilnog izvora ne možete se pouzdati u dobivene spektre. Analitički signal se oslanja na prigušivanje izvora zračenja uzorkom.
Pokrenite standard za umjeravanje stavite komad polistirenske folije u držač uzorka. Bez probnog rada na uzorku poznatih spektra koji se zove standard, nemate sigurnost da spektrofotometar ispravno radi.
Dohvatite spektre za uzorak polistirena. Usporedite spektre sa spektrima u standardnoj referenci IR spektra. Uvjerite se da svi očekivani vrhovi postoje na ispitnim spektrima. Mjesto vrhova mora se uskladiti s valnom duljinom apsorpcije.
Provjerite spektre da biste bili sigurni da je jačina signala unutar 95 posto maksimuma za najjači vrh. Ako je najjači vrh u spektrima više ili manji od pune skale, podesite prigušenje za postizanje ispravne snage signala.
IR spektrofotometar kalibrirajte često. Minimalna učestalost umjeravanja treba sadržavati skeniranje neposredno prije i dan nakon vašeg rada.