Sadržaj
Izolacija bakterija iz tla važan je prvi korak u mnogim mikrobiološkim eksperimentima. Jednom kada su izolirane, bakterije se mogu dodatno analizirati kako bi se utvrdile stvari, poput njihove vrste i njihove funkcije u tlu. Čak i mala količina tla može sadržavati milijune bakterija, zbog čega je potrebno razrijediti uzorak tla prije izoliranja bakterija iz uzorka.
Izmjerite 100 ml. destilirana voda u graduiranom cilindru i dodajte je u sterilnu bocu.
Odmjerite 1 g uzorka tla i dodajte ga u bocu destilirane vode.Bocu čvrsto zatvorite i protresite da se temeljito promiješa otopina.
Označite sterilne epruvete "10 ^ -3", "10 ^ -4", "10 ^ -5" i "10 ^ -6." Dodajte 9 ml destilirane vode u svaku epruvetu, koristeći jednu od pipeta.
Prebacite 1 ml otopine u bocu u epruvetu s oznakom "10 ^ -3" novom pipetom. Zatvorite cijev i nježno je vrtite dok se otopina dobro ne pomiješa.
Prenesite 1 ml otopine u epruvetu "10 ^ -3" u epruvetu "10 ^ -4" s novom pipetom. Zatvorite cijev "10 ^ -4" i namotajte da se miješa. Ponovite ovu metodu kako biste otopinu prenijeli iz epruvete "10 ^ -4" u epruvetu "10 ^ -5", a zatim iz epruvete "10 ^ -5" u epruvetu "10 ^ -6".
Izvadite tri uzorka svaki od epruveta "10 ^ -4", "10 ^ -5" i "10 ^ -6". Pomoću nove pipete prenesite 1 ml otopine iz epruvete u Petrijevu ploču. Na ploču dodajte oko 15 ml hranjivog agara; zatim stavite poklopac na tanjur i lagano zavrtite tako da agar prekriva dno tanjura.
Napravite kontrolnu ploču stavljanjem 1 ml destilirane vode u Petrijevu ploču pomoću nove pipete. Dodajte agar; stavite poklopac i zakrenite tanjur.
Ostavite Petrijeve ploče uspravno dok agar ne postavi. Zatim preokrenite ploče i inkubirajte ih - u inkubatoru ili na sobnoj temperaturi - u roku od samo 24 sata do pet dana.
Izvadite ploče iz inkubatora nakon željene količine vremena inkubacije. Brojanje bakterijskih kolonija na pločama koje sadrže oko 30 do 300 kolonija. Upotrijebite trajni marker za označavanje kolonija koje ste već prebrojili kako biste izbjegli brojanje istih kolonija dva puta.
Podijelite broj kolonija koji se računaju razrjeđivanjem - "10 ^ -4", "10 ^ -5" ili "10 ^ -6" - otopine tla za svaku ploču. Pronađite broj obradivih bakterija u izvornom gramu tla, tako što ćete usporediti rezultate sa svake ploče koja se može računati.