Sadržaj
Tekuća kromatografija visokih performansi tehnika je za laboratorijsku analizu smjese. To je učinkovita vrsta kromatografije koja za pokretanje uzorka smjese kroz kolonu koristi visoki tlak, a ne samo gravitaciju. Uzorak se ubrizgava, a zatim pumpa koja sadrži veliku količinu pritiska pomaže da se uzorak pomakne duž napunjene kolone, gdje je odvojen na pojedinačne komponente. Potom se detekcijom analizira ovo razdvajanje kako bi se dobili rezultati.
Mjesto ubrizgavanja
Da bi se ubrizgao u HPLC, uzorak se prvo mora otopiti u polarnom tekućem otapalu, poželjno onom s poznatim spektrom HPLC da bi se njegovi podaci mogli razlikovati od uzoraka. Tečna otopina koja sadrži uzorak stavlja se u instrument i šalje u kolonu. Stvarno mjesto mjesta ubrizgavanja ovisi o marki instrumenata. U većini slučajeva postupak ubrizgavanja je automatiziran, ali u nekim slučajevima laboratorijski radnik mora ubrizgati uzorak pomoću male igle u štrcaljki.
Komponenta pumpe
Crpna komponenta HPLC jedinice je neophodna jer osigurava tlak koji tjera uzorak kroz stupac. Jačina crpke varira, ali snažna može stvoriti pritisak do 6000 psi ili funti po kvadratnom inču, koji se primjenjuje nakon ubrizgavanja uzorka. To omogućava da uzorak prođe brže i učinkovitije kroz stupac nego kad bi prošao kroz samo gravitacijsku silu.
Opis stupca
Povećana brzina uzorka pomoću pumpe koji prolazi kroz kolonu omogućava upotrebu stupca različitog tipa od onog koji se koristi u jednostavnoj tekućinskoj kromatografiji. Materijal za pakiranje u koloni može imati puno manju veličinu čestica, što povećava površinu i stoga pomaže interakcije uzorka sa kolonom. Većina HPLC stupaca djeluje kroz polaritet. Uzorak se otopi u polarnom otapalu, a stupac se sastoji od uglavnom nepolarnih ugljikovodika. Polarni dijelovi molekule uzorka prolaze kroz kolonu vrlo brzo, jer oni ponajprije komuniciraju s otapalom, dok uzorci nepolarne komponente zadržavaju se u koloni, formirajući slabu interakciju s komponentama stupca. Stoga komponente uzoraka silaze sa stupca u redoslijedu od većine polarnih do većine nepolarnih.
Funkcija detektora
Detektori također variraju ovisno o vrsti HPLC instrumenta koji se koristi. Međutim, većina funkcionira na isti osnovni način. Izvor ultraljubičastog svjetla sjaji na odvojenim komponentama uzorka dok silaze sa kolone. Većina organskih spojeva apsorbira određenu količinu svjetlosti, tako da dok prolaze pored primijenjene zrake svjetlosti, detektor može pokupiti koliko svjetla apsorbira. Detektor također bilježi vrijeme zadržavanja komponenata na temelju redoslijeda kojim se spuštaju s kolone. Taj se izlaz tada može analizirati na temelju površine vrha da bi se utvrdila točna priroda komponenata uzoraka.