Sadržaj
- Bolja vizualizacija
- Identifikacija i klasifikacija
- Otkrivanje održivosti
- Identifikacija staničnih struktura
Mikrobiolozi proučavaju karakteristike mikroorganizama poput algi, protozoja, bakterija, gljivica i virusa pomoću mikroskopa. Iako je neke organizme poput protozoja i stanica kvasca lako promatrati pomoću mokrog držača, bakterijskim stanicama potrebno je bojenje. Znanstvenici su razvili nekoliko metoda poput bojenja po Gramu, brzog bojenja kiselinama i fluorescentnog bojenja za bolju vizualizaciju bakterijskih stanica i staničnih struktura. Pomoću takvih metoda bojenja moguće je identificirati strukturne značajke koje pomažu klasificirati bakterije.
Bolja vizualizacija
Bakterijski organizmi su toliko mali da ih je većina vidljiva samo pod mikroskopom s povećanjem od 1000X. Međutim, samo povećavanje veličine ne daje dovoljan stupanj jasnoće, tako da se bakterije moraju obojati prije promatranja kako bi se postigla jasnoća potrebna za vizualizaciju.
Identifikacija i klasifikacija
Bojenje bakterija radi razlikovanja između vrsta bakterija poznato je i kao različito bojenje. Mrlja po Gramu jedna je takva različita mrlja koja razlikuje bakterije na temelju sadržaja njihovih staničnih stijenki. U ovoj metodi bakterijske stanice reagiraju s kristalno ljubičastom mrljom i poprime ljubičastu boju. Nakon dodavanja sredstva za uklanjanje boje, neke bakterijske stanice izgube boju dok druge ne. Dodajući mrlju od safranina, dekolorirane ćelije poprime mrlju i pokaže se crvenom dok bakterijske stanice koje nisu izgubile boju ostaju ljubičaste. Bakterijske ćelije koje poprime crvenu boju nazivaju se gram negativnim organizmima, a one koje ne poprimaju boju klasificiraju se kao gram pozitivni organizmi. Bojanje po Gramu pruža brzu metodu za početnu identifikaciju bakterija koje su uključene u infekcije. Slično tome, postupak brzog bojanja kiselinom pomaže da se specifično identificiraju organizmi iz klase bakterija zvanih Mycobacteria, poput Mycobacterium tuberculosis.
Otkrivanje održivosti
U uzorcima bakterijske kulture često je važno otkriti prisutnost živih bakterijskih stanica. Metode bojanja poput fluorescentnog bojenja pomažu u otkrivanju jesu li stanice kulture održive ili ne. Žive bakterije imaju sposobnost pretvaranja mrlje 5-cijano-2,3-ditolil tetrazolij-klorida (CTC) u bojilo koje pokazuje crvenu fluorescenciju. Stoga, kada kulture obojene s CTC emitiraju takvu fluorescenciju, to ukazuje na prisutnost održivih bakterija. Propidijum jodid je mrlja koja djeluje samo na nežive stanice koje imaju oštećene membrane, te je stoga koristan u identificiranju mrtvih bakterijskih stanica.
Identifikacija staničnih struktura
Bojenje pruža metodu jasne vizualizacije nekoliko staničnih struktura. Na primjer, obojenje gorivom pomoću goriva omogućuje identifikaciju jezgre u bakterijskim stanicama, dok je Albertova mrlja korisna u vizualizaciji metahromatskih granula. Slično tome, tehnika impregnacije u srebru omogućava identifikaciju spiroheta. Flagele je lako uočiti kad ih je obojala Ryuova mrlja. Bijela boja od malahita pomaže identificirati bakterijske spore.