Sadržaj
Biokemija proučava molekule poput DNK, RNK i proteina. Tehnike mrlja su ono što znanstvenici koriste za odvajanje ovih vrsta molekula. U stanicama postoje kao smjesa. Udaranje omogućava istraživačima da pronađu jedan protein među mnogima, poput igle u plastu sijena. Ispiranje se obično vrši puštanjem mješavine DNA, RNA ili proteina kroz gel ploču. Ovaj gel omogućava malim molekulama da se kreću brže od većih. Odvojene molekule zatim se pritisnu na membranu, što pomaže premještanju molekula iz gela na membranu. Molekule se lijepe za membranu, ali ostaju na istom mjestu, odvojene jedna od druge, kao da su još u gelu.
Western Blot
Western blotning je uobičajena tehnika odvajanja proteina po veličini, ali u ravnim stupcima. Ovi paralelni stupci omogućavaju istraživačima da uspoređuju količinu proteina u različitim uzorcima koji se trče jedan pored drugog, poput kuglanih staza. Na primjer, ako biste testirali učinak različitih količina lijeka na rast stanica, liječili biste četiri različite skupine stanica s različitom količinom lijeka. Tada možete razbiti stanice i otvoriti bjelančevine svake skupine u posebnim trakama na gelu. Rasprostiranje proteina na ovaj način omogućuje vam da vidite što povećava koncentracija lijekova na određeni protein.
Sjeverni blot
Northern blot se koristi za otkrivanje RNA. Stanice se mogu otvoriti i otpustiti RNA. RNA iz različitih tipova stanica može se izvoditi na posebnim trakama gela. Gel širi različite RNA po veličini. Ovi uredni, paralelni redovi RNA omogućavaju istraživaču da usporedi koji tip stanice ima koliko i koja RNA. Ova metoda omogućuje istraživaču da utvrdi imaju li stanice određene bolesti više ove RNA ili manje te RNA. Sjeverno mrlje može otkriti kako bolest djeluje na razini proizvodnje RNA.
Južni blot
Southern blotting je originalna tehnika brisanja, kojom je pokrenut sustav imenovanja. Izumio ga je Edwin Southern. Southern mrlja se koristi za otkrivanje količine DNA u smjesi. Baš kao kod proteina i RNA, tako se i DNA stanice može otpustiti kada se ta stanica otvori. Južno mrlje razdvaja DNK od različitih tipova stanica prema veličini. DNK iz svakog uzorka se širi u uredne, paralelne trake. Pojedinačni dijelovi DNK mogu se detektirati pomoću radioaktivne ili fluorescentne sonde koja je dizajnirana tako da se veže samo za taj komad DNK. Energetski signal radioaktivne sonde ili bljeskovi svjetlosti fluorescentnog signala govore istraživačima koliko tog dijela DNK ima u svakom uzorku.
Ostale mrlje
Tri glavne tehnike mrlja - zapadna, sjeverna i južna - modificirane su na različite načine kako bi se otkrile malo različite molekule. Na primjer, zapadnjačka mrlja nasuprot južnoj mrlji. otkriva protein i DNA, respektivno. Svaka modificirana tehnika općenito se izvodi na uobičajen način, ali koristi se drugačijom metodom za otkrivanje molekule koja se širi u paralelne staze. Jugozapadne mrlje otkrivaju molekule proteina zalijepljenih za DNK. Sjeverozapadne mrlje otkrivaju molekule proteina zalijepljenih u RNA. Farwestern mrlje otkrivaju molekule bjelančevina koje su zaostale za druge bjelančevine.