Sadržaj
Escherichia coli, E. coli, je bakterija koja raste u donjim crijevima sisavaca. Ova je bakterija prvi put otkrivena u kasnim 1800-ima. Od tada ima dugu povijest uporabe u znanstvenim istraživanjima. To je najčešće korišteni organizam u molekularnoj genetici. Dio razloga zašto se E. coli često koristi u znanstvenim istraživanjima je taj što ga je lako uzgajati u laboratoriju. Čimbenici koji E. coli čine jednostavnim za uzgoj su jednostavne prehrambene potrebe, brza stopa rasta i umjereni zahtjevi za održavanjem.
Sterilizirajte inokulirajuću petlju stavljajući je u plamen Bunsenovog plamenika. Provucite donju polovicu petlje kroz plamen dok ne svijetli crvenom bojom.
Ostavite petlju da se ohladi. Možete je dodirnuti sterilnim agrom na tanjuru kako biste bili sigurni da se ohladio. Ne stavljajte petlju na stol i ne dopuštajte da kontaktira bilo što drugo osim sterilnog agara ili željene kulture sad kad je sterilizirana.
Umočite petlju u kulturu E. coli, a zatim je uklonite.
Otvorite ploču s agarima i lagano klizite petlju naprijed-natrag po površini jednog dijela agara. Pazite da se ne progrejete kroz agar sa petljom. Agar pruža hranjive tvari koje E. coli trebaju za rast.
Stavite petlju u plamen Bunsen plamenika kako biste je sterilizirali. Jednom kada se štap za hlađenje ohladi, dodirnite ga sterilnim dijelom tanjura da biste bili sigurni da je hladan, a zatim gurnite petlju kroz svoj prvi utor kako biste napravili drugi trag. Ova druga linija je razrijeđena verzija prvog niza. Ponavljajte ovaj postupak sterilizacije i klizanja sve dok se više dijelova agar ploče ne poklopi. Razlog zbog kojeg to radite jest da kasnije kasnije možete birati iz pojedinih, klonskih kolonija. Ovo će vam pomoći da imate barem jedan dio s pojedinačnim kolonijama - ne previše koncentriran (što će imati preveliki rast i ne dopušta vam odabir sa jedne kolonije) i ne previše razrijeđen (što ne bi dalo kolonije) ,
Posljednji put sterilizirajte petlju u plamenu prije nego što je stavite na stranu u radni prostor.
Vratite vrh na ploču s agarima. Ploču okrenite naopako i stavite je u inkubator postavljen na 37 stupnjeva Celzijusa (98,6 stupnjeva celzijusa). Ova idealna temperatura inkubiranja simulira temperaturu ljudskog tijela u kojem boravi E. coli. U roku od 24 do 48 sati na ploči agar će se pojaviti vidljive kolonije bakterija E. coli.