Sadržaj
Iako ih se ne može vidjeti golim okom, bakterije su posvuda. Oni postoje u hrani, zemlji, vodi, površinama unutar naših domova te u i na našim tijelima. Bakterije općenito postoje u miješanoj populaciji. Izdvajanje specifične bakterije od ostalih bakterijskih vrsta u datom uzorku omogućuje mikrobiolozima da prouče njegovu strukturu i funkciju, karakteristike korištene u njezinoj identifikaciji. Mikrobiolozi često izoliraju bakterije koristeći jednu od nekoliko tehnika ploča.
alat
Za prijenos mikroorganizama koristi se inokulacijska petlja. Sastoji se od nikromne ili platinaste žice s malom, kružnom petljom na jednom kraju. Drugi kraj je ravan i uvlači se u kvaku. Dostupne su i plastične jednokratne petlje. Bakterije se mogu izolirati samo ako rastu. Mikrobiolozi uzgajaju bakterije za izolaciju ploča u plitkim, okruglim petrijevim posudama ispunjenim čvrstim medijem, nazvanim agar. Agar oponaša okoliš u kojem bakterije prirodno rastu. Posude sa medijima su sterilne i poklopljene kako bi se spriječio rast neželjenih organizama. Tijekom izolacije pločaste pločice, inokulirajuća petlja se opetovano sterilizira u plamenu Bunsenovog plamenika.
Načelo
Tehnika pločica s prugama najpopularnija je metoda izoliranja specifičnih bakterija iz uzorka koji sadrži mješavinu mikroorganizama. Tehnika bitno smanjuje broj organizama i smanjuje njihovu gustoću. Omogućuje mikrobiolozima razlikovanje i izoliranje pojedinih bakterijskih kolonija. Kolonija je vidljivi skup bakterija. Sve bakterije u jednoj koloniji potječu iz iste bakterijske stanice. Stoga su pojedine kolonije „čiste“ kolonije. Čista kolonija prenosi se na drugu ploču radi dobivanja čiste kulture koja se sastoji od jedne vrste bakterija.
Postupak
Ako se pravilno rade, izolacija pločica s prugama istiskuje uzorak i omogućava da se pojedine bakterijske stanice razviju u izolirane kolonije. Mikrobiolog započinje sterilizacijom inokulacijske petlje u plamenu. Ona hladi petlju dodirivši je na agar, zatim umoči petlju u uzorak i širi je naprijed-natrag kako bi pokrila dio tanjura. Ona sterilizira petlju, hladi je i inokulira drugi, susjedni dio ploče povlačenjem petlje kroz prvi dio i prekrivanjem drugog dijela cik-cak gibanjem. To skuplja mali broj bakterija iz prvog odjeljka i prenosi ih u drugi odjeljak. Broj ponavljanja ovog osnovnog postupka ovisi o primijenjenoj metodi ploča sa prugama. Unatoč metodi, originalni uzorak koristi se za inokulaciju samo prvog dijela ploče.
Streak Ploča Metoda
Metode pločica s prugama razlikuju se o broju narezanih presjeka agara. T-Streak metoda koristi tri odjeljka: gornju polovicu i dva jednaka dna. Početna inokuluma se postavlja u gornju polovicu tanjura. Bakterije se povlače iz gornjeg dijela u jedan od donjih odjeljaka, zatim iz tog donjeg dijela u drugi. U kvadrantnoj su metodi prošarana četiri dijela jednake veličine. Metoda kontinuiranog strijanja obično uključuje inokulaciju gornje polovice ploče, rotiranje za 180 stupnjeva i inokulaciju druge polovice ploče bez sterilizacije petlje ili povlačenja bakterija iz prethodnog odjeljka.