Sadržaj
Znanstvenici koriste serijska razrjeđenja (serija od 1:10 razrjeđenja) kako bi izračunali gustoću naseljenosti bakterijskih kultura. Kada se kultura koja sadrži mali broj bakterija posadi i inkubira, svaka ćelija teoretski biti dovoljno daleko od ostalih stanica da će formirati vlastitu koloniju. (U stvarnosti, neke kolonije mogu biti potomci dviju obližnjih stanica, ali to je rijetko u razrijeđenim kulturama, pa je broj kolonija vrlo dobra procjena broja stanica izvorno prenesenih na ploču.) Jer gustoća naseljenosti je nepoznato, moraju se upotrijebiti različita razrjeđenja kako bi se jedna ploča završila s odgovarajućim brojem kolonija.
Serijska razrjeđenja
Označite šest epruveta (svaka sadrži 9 ml medija za rast) kao 1 do 6. Označite šest ploča agarima od 1 do 6. Pomoću pipeta i sterilnim vrhom pipete od 1 mililitara (ml) prenesite 1 ml bakterijske kulture u epruvetu. 1.
Dobro promiješajte i prenesite 1 ml iz epruvete 1 u epruvetu 2 pomoću pipete i sterilnih 1 ml savjeta.
Ponovite korak 2 za preostale epruvete, svaki put prenoseći 1 ml iz nedavno korištene epruvete u sljedeću epruvetu.
Pomoću pipeta i sterilnih 0,1 ml savjeta prenesite 0,1 ml iz epruvete 1 na ploču s agarima. Zapalite staklenu šipku u obliku slova L i upotrijebite je za ravnomjerno raspoređivanje kaplja oko ploče. Inkubirajte ploču 48 sati na odgovarajućoj temperaturi za bakterije koje se koriste. Različite vrste bakterija imaju različite optimalne temperature rasta. Ako ne možete pronaći optimalnu temperaturu rasta pomoću referentnog materijala, pokušajte inkubirati ploče na 25 i 37 stupnjeva.
Ponovite korak 4, svaki put kad prenesete tekućinu iz druge epruvete na odgovarajuću ploču.
Proračun stanovništva
Promatrajte šest ploča i odaberite onu sa 30 do 200 izoliranih kolonija.
Pomnožite broj kolonija na ploči s 10 da biste izračunali broj stanica po mL kulture iz korištene epruvete za razrjeđivanje.
Pomnožite broj iz koraka 2 sa 10 ^ (broj ploče) da biste izračunali broj ćelija po ml izvorne kulture. Vrijednost 10 ^ (broj ploče) je faktor razrjeđivanja kulture koja se koristi za inokulaciju te ploče.