Enzim je protein koji katalizira (povećava brzinu) kemijskih reakcija. Optimalna temperatura većine enzima, odnosno temperatura pri kojoj enzimi najbolje olakšavaju reakcije, je između 35 i 40 stupnjeva Celzija. Povećanje temperature unutar ovog prozora povećava brzinu reakcije, jer pobuđuje molekule i povećava brzinu kojom se enzimi / reaktanti sudaraju i reagiraju na stvaranje proizvoda. Međutim, previsoka temperatura može denaturirati enzim i spriječiti ga da uopće djeluje.
Odredite optimalnu temperaturu enzima zagrijavanjem reakcije na infinitesmalnim količinama i uzimanjem malih uzoraka reakcije kako biste odredili kada se pojavi maksimalna brzina stvaranja proizvoda.
Odaberite metodu. Odredite kako ćete mjeriti koncentraciju svog proizvoda u različitim točkama eksperimenta. Na primjer, možete mjeriti koncentraciju mnogih proizvoda pomoću spektrofotometra i izračunavanjem koncentracije apsorbancije ili mjerenjem fluorescencije i izračunavanjem koncentracije iz fluorescencije.
Postavljanje eksperimenta. Stavite svoje reaktante i enzim u malu posudu s poklopcem, poput scintilacijske bočice. Reakcija će započeti. Stavite scintilacijsku bočicu u veću čašu vode sobne temperature. Stavite čašu na grijaću ploču. U čašu stavite termometar. To vam omogućuje mjerenje temperature reakcije u različitim točkama.
Uzmi reakcijski uzorak od 100 mikrolitara na sobnoj temperaturi, oko 25 stupnjeva Celzijusa. Uključite grijaću ploču. Na različitim temperaturama između 30 i 40 Celzijevih stupnjeva (30,5, 31, 31,5 itd.) Uzmite 100 mikrolitskih uzoraka svoje reakcije.
Odredite koncentraciju vašeg proizvoda pri svakoj temperaturi. Kada temperatura poraste iznad 40 Celzijevih stupnjeva, vidjet ćete smanjenje brzine kojom se supstrat pretvara u proizvod, jer je enzim denaturiran. Točka u kojoj se proizvod proizvodi s maksimalnom brzinom je točka u kojoj je temperatura optimalna.