Sadržaj
Spektrofotometrija je neprocjenjivo sredstvo u kemiji i biologiji. Osnovna ideja je jednostavna: različite tvari bolje apsorbiraju svjetlost / elektromagnetsko zračenje na nekim valnim duljinama nego na drugim. Zato su neki materijali transparentni, a drugi, primjerice, obojeni. Kada kroz otopinu sjajite određenu valnu duljinu, što je veća koncentracija, to će više svjetla apsorbirati. Da biste izračunali koncentraciju, morate usporediti svoje čitanje s očitanjem za standarde poznate koncentracije. Postupak u nastavku prilično je općenit postupak napisan u vidu laboratorija za nastavu kemije, ali može se izmijeniti i za druge postavke.
Kao i uvijek kad radite u laboratoriju, obucite naočare, rukavice i kaput dugih rukava kako biste osigurali vlastitu sigurnost.
Gurnite gumenu žarulju da je isprazni, a zatim je stavite iznad diplomirane pipete i ostavite da se žarulja opusti tako da usisava vodu u pipetu. Zatim uklonite žarulju i prstom zatvorite vrh pipete; ovo će zapečatiti pipetu tako da otopina unutar nje ne teče sve dok vaši prst ne bude uklonjen. Lagano podignite rub prsta da malo pipete istekne iz pipete, sve dok ne postignete željeni volumen. Vježbajte s malo vode i čašom kako biste stekli osjećaj kako djeluje diplomirana pipeta. Na poveznici u odjeljku Resursi nalazi se filmski isječak koji vam pokazuje kako koristiti pipetu za slučaj da nikad prije niste radili s njom.
Označite 5 epruveta kao norme 1-5. Možete ih označiti pomoću trake za maskiranje i olovke ili pomoću suhog markera za brisanje.
Odaberite pet koncentracija za svoje standarde. Želite da se standardne koncentracije odvoje jedna od druge otprilike u istom intervalu - npr. 0,1 mola, 0,2 mola, 0,3 mola itd. - i otprilike u istom rasponu kao što očekujete da će biti nepoznato. Zasad koristite sljedećih pet koncentracija, ali imajte na umu da ćete ih morati izmijeniti tijekom izvođenja vlastitog eksperimenta:
Standard 1: 0,1 mola Standard 2: 0,2 mola Standard 3: 0,3 mola Standard 4: 0,4 mola Standard 5: 0,5 mola
Zatim uzmite 1 molarnu standardnu otopinu i dodajte sljedeće količine u epruvete 1-5. Imajte na umu da se ovi iznosi izračunavaju korištenjem gore navedenih koncentracija, tako da ćete ih možda trebati modificirati po potrebi tijekom izvođenja vlastitog eksperimenta.
Standard 1: 0,8 mililitara Standard 2: 1,6 mililitara Standard 3: 2,4 mililitara Standard 4: 3,2 mililitara Standard 5: 4 mililitara
Isperite graduiranu pipetu, a zatim prenesite sljedeće količine deionizirane vode:
Standard 1: 7,2 mililitara Standard 2: 6,4 mililitara Standard 3: 5,6 mililitara Standard 4: 4,8 mililitara Standard 5: 4,0 mililitara
U osnovi, ideja je povećati količinu otopine u svakoj epruveti do 8 mililitara.
Zapremite svaku od standardnih epruveta parafilmom i okrenite ih da se miješaju.
Označite još pet epruveta kao "Nepoznato 1-5." Svakom dodajte iste količine nepoznate ili testne otopine kao što ste koristili s 1 molarnom otopinom za norme. Drugim riječima, nepoznato 1 sadržavat će 0,8 mililitara ispitne otopine i 7,2 mililitara vode, nepoznato 2 sadržavat će 1,6 mililitara ispitne otopine i 6,4 mililitara vode, i tako dalje.
Zatvorite svaku nepoznanicu parafilmom i pažljivo je preokrenite da se pomiješa.
Uključite spektrofotometar i ostavite ga da se zagrije. Duljina vremena ovisit će o modelu i proizvođaču.
Postavite valnu duljinu na spektrofotometru. Valna duljina ovisit će o vrsti kemikalije u vašem eksperimentu. Za sada pretpostavite 500 nm, iako imajte na umu da ćete to trebati promijeniti za različite eksperimente.
Umjerite svoj spektrofotometar. Postupak umjeravanja razlikuje se ovisno o uređaju koji koristite. Za Spectronic 20, uobičajeni model u nastavnim laboratorijima, prvo ćete prilagoditi stroj tako da čita "0 posto T" kada nije učitana kiveta, a zatim podesite tako da glasi "100% T" kad prazna kiveta sadrži deioniziranu napunjena je samo voda. Ti se postupci mogu razlikovati ovisno o vrsti stroja koji koristite, pa potražite detalje u uputama proizvođača.
Nakon što je stroj kalibriran, uzmite standardnu epruvetu i izlijte sadržaj u čistu kivetu dok ne dosegnu liniju punjenja. Obrišite kivetu kimvipom kako biste uklonili sve prste ili drugu prljavštinu. Umetnite kivetu u spektrofotometar i zabilježite očitanje "% T".
Ponovite ovaj postupak za svih 10 uzoraka. BUDITE ODREĐENI da očistite kivetu između uzoraka kako biste bili sigurni da su vaši rezultati što točniji.
Uzmite rezultate za svoje standarde i unesite ih u program za proračunske tablice / grafikone poput Excel ili OpenOffice.
Pomoću programa proračunske tablice podijelite 100 posto po svakoj od "% T" vrijednosti za norme, a zatim uzmite zapis rezultata. Ovaj će vam proračun dati apsorbanciju. Ako unesete formulu, program proračunske tablice izvršit će proračun za vas.
Primjer: Ako je% T 50,6, formula koju unesete u program proračunske tablice bila bi sljedeća:
zapisnik (100 / 50,6)
Program proračunske tablice izvest će aritmetiku.
Učinite isto za svih pet nepoznatih / eksperimentalnih vrijednosti.
Grafikujte vrijednosti apsorbancije za svih pet standarda, s koncentracijom na x-osi i apsorbancijom na osi y. Koristeći program za proračunske tablice, uklopite linearnu jednadžbu na ovaj graf. Jednadžba će biti oblika y = mx + b. Većina programa proračunskih tablica imat će funkciju linearne regresije. Pogledajte detalje o tome kako koristiti značajku linearne regresije u korisničkom priručniku programa za proračunske tablice.
Uzmite jednadžbu za najprikladniju liniju iz programa proračunske tablice i riješite je za y oduzimanjem b s obje strane i dijeljenjem obje strane s m. Rezultat će izgledati ovako:
(y - b) / m = x
gdje su b i m vrijednosti pronađene u programu za proračunske tablice.
Provjerite svoje vrijednosti apsorpcije za nepoznanice i odaberite tri koje padaju približno u istom rasponu kao i standardi. Koristite ove tri vrijednosti apsorbancije za svoje preostale proračune. Ako svih pet padne u istom rasponu kao i standardi, umjesto njih možete koristiti svih pet, ali trebate ih upotrijebiti najmanje tri.
Uključite svaku od tri vrijednosti apsorpcije u jednadžbu umjesto y. Sjetite se da je vaša jednadžba bila u sljedećem obliku:
(y - b) / m = x
Dakle, želit ćete vrijednost apsorbancije za svaku nepoznanicu unijeti u jednadžbu umjesto y, a zatim izračunati x. Pomoću programa proračunske tablice možete napraviti ovaj izračun za vas i učiniti ga bržim. Sada ste izračunali koncentraciju kemikalije koja vas zanima u tri vaše razrijeđene nepoznanice. Međutim, izvorna otopina je razrijeđena da biste pripremili ove nepoznanice, tako da sada morate raditi unatrag i izračunati koncentraciju izvorne otopine na temelju faktora razrjeđenja.
Svaki nepoznati uzorak koji ste umetnuli u spektrofotometar razrijeđen je različitom količinom. Prema tome, sada biste trebali podijeliti koncentraciju koju ste izračunali na temelju apsorbancije za svako nepoznato čitanje na sljedeći način:
Nepoznato 1: Podijeli sa 0,1 Nepoznato 2: Podijeli sa 0,2 Nepoznato 3: Podijeli sa 0,3 Nepoznato 4: Podijeli sa 0,4 Nepoznato 5: Podijeli sa 0,5
Imajte na umu da se te brojke temelje na pretpostavci da koristite gore navedena razrijeđenja. Ne zaboravite da promijenite ove vrijednosti ako ste razrijedili uzorke u drugoj količini.
Dodajte svoje rezultate i podijelite ih s brojem rezultata. Ovo će vam dati prosjek. Navedite ovaj broj kao svoj nalaz koncentracije izvorne otopine.